voeto.ru   страница 1страница 2страница 3страница 4страница 5
скачать файл

Таблица 4.

Перенесенные заболевания и экстрагенитальная патология у обследованных женщин.





Перенесенные заболевания и

экстрагенитальная патология


I группа

(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная группа (n=50)


Инфекционные заболевания (ветряная оспа, краснуха, корь, скарлатина, эпидемический паротит, вирусный гепатит)

22 (73,3±7,4%)*

9 (75,0±14,9%)*

43( 79,6±14,1%)*

41 (82,0±8,7%)*

Острые и хронические заболевания органов дыхания (бронхит, пневмония, плеврит, бронхиальная астма)

5 (16,7±2,3%)

2 (16,7±5,2%)

6 (11,1±2,6%)

7 (14,0±1,2%)

Острые и хронические заболевания ЛОР-органов

( тонзиллит, гайморит, ринит, отит, фарингит)



14 (46,7±4,3%)*

4 (33,3±13,6%)

23 (42,6±6,2%)*

17 (34,0±6,6%)*

Заболевания органов пищеварения (гастрит, язвенная болезнь желудка или двенадцатиперстной кишки, колит, проктит, холецистит, панкреатит)

7 (23,3±2,9%)

1 (8,3±0,8%)

11 (20,4±5,3%)

10 (20,0±4,1%)

Заболевания почек и мочевыводящих путей (пиелонефрит, мочекаменная болезнь, цистит, аномалии развития почек и мочевых путей)

4 (13,3±1,6%)

3 (25,0±8,6%)

7 (12,9±2,7%)

7 (14,0±1,2%)

Заболевания сердечно-сосудистой системы (вегетососудистая дистония, гипертоническая болезнь, пролапс митрального клапана)

5 (16,7±2,3%)

2 (16,7±5,2%)

4 (7,4±0,9%)

6 (12,0±1,1%)

Заболевания эндокринной системы (гипотиреоз, ожирение)

3 (10,0±0,6%)

1 (8,3±0,8%)

3 (5,6±0,3%)

4 (8,0±0,5%)

* - различия достоверны, р < 0,05



Таблица 5.

Перенесенные гинекологические заболевания у обследованных женщин.

Перенесенные гинекологические

Заболевания


I группа


( n=30)

II группа


( n=12)

III группа


( n=54)

Контрольная


Группа

(n=50)


Фоновые заболевания шейки матки (эктопия, эктропион, полип цервикального канала)

13 (43,3±4,1%)*


5 (41,7±13,9%)*

27 (50,0±6,4%)*

16 (32,0±6,5%)*

Миома матки

1 (3,3±0,2%)

0 (4,2±0,3%)

3 (5,6±0,3%)

2 (4,0±0,2%)

Нарушения менструального цикла, дисфункция яичников, эндометриоз

5 (16,7±2,3%)

2 (16,7±5,2%)

7 (12,9±2,7%)

5 (10,0±0,8%)

Бесплодие: первичное, вторичное

3 (10,0±0,6%)

2 (16,7±5,2%)

14 (25,9±6,0%)

10 (20,0±4,1%)

Операции на матке и придатках (миомэктомия, тубэктомия, ушивание перфоративного отверстия на матке, резекция яичников)

2 (6,7±0,5%)


1 (8,3±0,8%)


4 (7,4±0,9%)


3 (6,0±0,3%)




Инфекционно-воспалительные заболевания мочеполовых органов.

25 (83,3±8,1%)*

9 (75,0±14,9%)*

41 (75,9±13,8%)*

28 (56,0±7,4%)*


Воспалительные заболевания органов малого таза: сальпингоофорит, эндометрит, пельвиоперитонит

5 (20,0±2,4%)

2 (22,2±8,4%)

16 (39,0±6,3%)

9 (32,1±6,5%)


Инфекции, передаваемые половым путем

9 (36,0±3,2%)

3 (33,3±13,6%)

23 (56,1±6,7%)

8 (28,6±5,4%)

Бактериальный вагиноз

16 (64,0±7,0%)

5 (55,6±14,0%)

29 (70,7±11,2%)

22 (78,6±8,3%)

Кандидозный вульвовагинит

7 (28,0±3,0%)

2 (22,2±8,4%)

18 (43,9±6,4%)

12 (42,9±7,0%)

* - различия достоверны, р < 0,05




Таблица 6.

Результаты сексуального анамнеза обследованных женщин.

Анализируемые признаки


I группа


( n=30)

II группа


( n=12)

III группа


( n=54)

Контрольная


Группа

(n=50)


Раннее начало половой жизни (до 18 лет)

14 (46,7±4,3%)

6 (50,0±14%)

32 (59,3±7,1%)*

31 (62,0±7,7%)*

Число половых партнеров в течение всей половой жизни:

- один


- от 2 до 5

- от 6 до 10

- более 10


6 (20,0±2,4%)

15 (50,0±5,1%)*

7 (23,3±2,9%)

2 ( 6,7±0,5%)


2 (16,7±5,2%)

6 (50,0±14%)

3 (25,0±8,6%)

1 (8,3±0,8%)


4 (7,4±0,9%)

27 (50,0±6,4%)*

17 (31,5±6,0%)*

6 (11,1±2,6%)


5 (10,0±0,8%)

26 (52,0±7,2%)*

15 (30,0±6,1%)

4 (8,0±0,5%)


Незамужем, из них:

-постоянный половой партнер более 6 мес.

-новые половые контакты в предыдущие 1-3 мес.


17 (56,7±6,3%)

11 (64,7±7,1%)


6 (35,3±3,2%)

7 (58,3±14,2%)

5 (71,4±14,6%)


2 (28,6±9,1%)

21 (38,9±6,3%)

6 (28,6± 6,0 %)


15(71,4±11,1%)*

24 (48,0±7,1%)

17 (70,8±7,8%)*


7 (29,2±6,0%)

Состоят в браке, из них

указали на внебрачные связи



13 (43,3±4,1%)

3 (23,1±2,9%)



5 (41,7±13,9%)

-


33 (61,1±7,0%)*

14 (42,4±6,2%)*



26 (52,0±7,2%)

-


Практиковали

  • орогенитальные контакты

  • аногенитальные контакты

26 (86,7±8,3%)*

4 (13,3±1,6%)

9 (75,0±14,9%)

-

44(81,5±14,5%)*

23 (42,6±6,2%)*

43 (86,0±8,9%)*

5 (10,0±0,8%)


Незащищенные половые контакты

в прошлом имели (включая половые контакты без презерватива с последующей обработкой раствором

мирамистина)

21 (70,0±7,4%)




8 (66,7±14,5%)


45(83,3±14,6%)




38 (76,0±8,1%)





* - различия достоверны, р < 0,05

Таблица 7.

Результаты акушерского анамнеза обследованных женщин.

Анализируемые признаки


I группа


( n=30)

II группа


( n=12)

III группа


( n=54)

Контрольная


Группа

(n=50)

Беременностей не было

Беременность в анамнезе

Роды


Роды превышали аборты

Аборты превышали роды

Внематочная беременность





  1. (56,7±6,3%)

13 (43,3±4,1%)

5 (38,5±3,6%)

4 (30,8±3,1%)

9 (69,2±7,3%)

-

7 (58,3±14,2%)



5 (41,7±13,9%)

1 (20,0±5,4%)

-

5 (100%)


1 (20,0±5,4%)

31 (57,4±6,8%)



23 (42,6±6,2%)

8 (34,8±6,1%)

5 ( 21,7±5,4%)

18 ( 78,3±13,8%)

2 (8,7±1,3%)

26 ( 52,0±7,2%)



24 (48,0±7,1%)

11 (45,8±7,0%)

7 (29,2±4,9%)

17 (70,8±7,8%)

-


* - различия достоверны, р < 0,05


Как видно из представленной таблицы 7, более чем у половины всех обследованных пациенток беременность в анамнезе отсутствовала. Среди женщин, имеющих беременности в анамнезе, количество беременностей у большинства (86,2%) не превышало 3, а соотношение числа абортов к числу родов в анамнезе у этих женщин составило 2 : 1. Во всех группах обследованных женщин количество абортов превышало количество родов (в I группе 69,2±7,3%, во II – 100%, в III - 78,3±13,8%, в контрольной – 70,8±7,8%). Статистических различий между группами по анализируемым показателям не выявлено, (р < 0,05). Наличие внематочной беременности в анамнезе отмечено у двух пациенток III группы и у одной - II группы, все они закончились тубэктомией.

С целью более углубленного обследования женщин каждой из четырех групп, нами проводились лабораторные исследования. При этом изучались особенности клинической картины заболевания в I-III группах в зависимости от присутствия патогенных и/или условно-патогенных микроорганизмов. В следующем разделе проводится анализ лабораторных методов исследования.

2.3.Методы исследования.

При обследовании женщин всех групп проводилось изучение анамнестических данных, а также использовались клинические, лабораторные, ультразвуковые и статистические методы исследования. Полученные данные вносились в индивидуальную карту пациенток.



2.3.1. Методика изучения анамнестических данных

При изучении анамнеза помимо сведений о перенесенных инфекционных болезнях в детском возрасте, наличии экстрагенитальных заболеваний, характере менструальной функции, исходе предшествующих беременностей, анализировались данные о возрасте начала половой жизни, количестве половых партнеров, наличии постоянного полового партнера, практике орогенитальных и аногенитальных контактов, методах контрацепции и профилактики ИППП, отмечалось наличие хронических воспалительных гинекологических заболеваний, а также заболеваний ЛОР органов и органов пищеварительной системы (табл. 3-7).



2.3.2. Методы клинического обследования

Во время клинического обследования оценивалось общее состояние и соматический статус женщин, выявлялось наличие жалоб на зуд, жжение наружных половых органов, дизурию, диспареунию, тазовые боли. Проводилась оценка состояния слизистой оболочки преддверия влагалища, наружного отверстия уретры, наличия и характера вагинальных выделений; пальпаторно оценивалось состояние мочеиспускательного канала и парауретральных желез. Проводился осмотр шейки матки и влагалища с помощью гинекологических зеркал; при этом особое внимание обращалось на состояние вульвы, слизистой оболочки влагалища и шейки матки: наличие воспалительных проявлений (гиперемии, отека), наличие в заднем своде влагалища отделяемого, его количество, цвет, консистенцию, запах, проводилось определение рН содержимого влагалища и аминный тест.

Измерение водородного показателя (рН) влагалищного содержимого, характеризующего его кислотность, выполнялось с помощью индикаторных бумажных полосок для рН-метрии с эталонной десятичной шкалой деления от 3.8 до 6.1 (Merck Германия).

Аминный тест использовался для клинической экспресс-диагностики бактериального вагиноза. При его выполнении на предметное стекло наносилась капля влагалищного отделяемого и добавлялось равное количество 10% раствора гидроокиси калия. Появление или усиление резкого неприятного запаха (запаха гнилой рыбы) свидетельствовало о положительных результатах теста, оно было обусловлено выделением летучих аминов – продуктов метаболизма облигатных анаэробных микроорганизмов.

При бимануальном исследовании оценивались положение, размеры, консистенция, наличие или отсутствие болезненности матки и ее придатков.
2.3.3. Лабораторные методы исследования: микроскопические, культуральные, серологические, молекулярно-биологические.

Лабораторные методы исследования выполнялись в лабораторно-диагностическом отделении клиники акушерства и гинекологии им. В.Ф.Снегирева ММА им. И.М.Сеченова и в научно-исследовательской лаборатории научно-производственной фирмы ООО «Гентех» г. Москвы.



Всем пациентам при первичном обращении выполнялись серологические исследования для исключения сифилиса, ВИЧ, гепатита В и С.

Для изучения состояния вагинального микроценоза, а также с целью диагностики трихомонадной или гонорейной инфекции (В соответствии с требованиями Приказа МЗ СССР № 936 от 12.07.85. “Об унификации лабораторных методов исследования в диагностике гонореи и трихомониаза”, Приказа МЗ СССР № 1570 от 04.12.86. “Об улучшении выявления больных гонореей и трихомониазом в акушерских и гинекологических отделениях (палатах, кабинетах), женских консультациях и урологических кабинетах поликлиник”, Приказа МЗ РФ № 415 от 20. 08.2003 “Гонококковая инфекция”.) проводили микроскопическое исследование вагинального, цервикального и уретрального отделяемого. Влагалищное отделяемое брали стерильной ложечкой Фолькмана из заднебоковых сводов влагалища при осмотре в зеркалах. Материал из цервикального канала, содержащий эпителиальные клетки, получали с помощью специального урогенитального зонда с щеточкой после предварительного удаления видимой слизи с шейки матки стерильным марлевым тампоном. Уретральное содержимое получали также с помощью желобоватого зонда. Полученный материал наносили на обезжиренное предметное стекло, подсушивали на воздухе, окрашивали мелтиленовым синим и по Граму. При микроскопическом исследовании окрашенных мазков отмечали лейкоцитарную реакцию, общее количество микробных клеток и их морфологию, наличие “ключевых” клеток во влагалищном отделяемом – эпителиальных клеток с адсорбированными на них мелкими грамвариабельными палочками. При этом качественная оценка микрофлоры проводилась по морфотипам и тинкториальным свойствам, количественная – согласно критериям Hugent R.P. (1991) в модификации А.С.Анкирской (2001);

Для оценки количественного и качественного состава микрофлоры влагалища (В соответствии с приказом МЗ СССР № 535 от 22.04.85. “Об унификации микробиологических методов исследования, применяющихся в клинико-диагностических лабораториях”.) проводили культуральное исследование содержимого заднего и боковых сводов влагалища и цервикального канала на факультативно-анаэробные бактерии, грибы и лактобациллы в лабораторно-диагностическом отделении клиники акушерства и гинекологии им. В.Ф.Снегирева ММА им. И.М. Сеченова. Степень микробной обсемененности определяли методом секторального посева отделяемого влагалища на 5% кровяной агар, среду Эндо, среду Сабуро и среду МРС. Посевы инкубировали в анаэробных условиях при температуре 37оС в течение 18 часов. При появлении роста подсчитывали общее количество колоний и микробов каждого вида отдельно, выражая степень колонизации в КОЕ/мл. Видовую идентификацию микроорганизмов проводили по общепринятым методикам /21/.

Выявление и количественную оценку U. urealyticum, M. hominis осуществляли культуральным методом с помощью микротестсистем (DUO, Франция) для выявления U. urealyticum и M. hominis. Исследования проводились в лабораторно-диагностическом отделении клиники акушерства и гинекологии им. В.Ф.Снегирева ММА им. И.М. Сеченова, а также при помощи метода ПЦР в научно-исследовательской лаборатории научно-производственной фирмы ООО «Гентех» г. Москвы.

Для выделения C. trachomatis из патологического материала использовали культуральный метод (перевиваемая клеточная линия McCoy) в лабораторно-диагностическом отделении клиники акушерства и гинекологии им. В.Ф.Снегирева ММА им. И.М. Сеченова, а также метод ПЦР в научно-исследовательской лаборатории научно-производственной фирмы ООО «Гентех» г. Москвы. Идентификацию C. trachomatis осуществляли в соответствии с методическими рекомендациями “Урогенитальный хламидиоз, уреаплазмоз, гарднереллез (диагностика, лечение, профилактика)”, утвержденными МЗ СССР (1988). С целью выявления многоочаговости инфекционного процесса клинический материал для лабораторного обследования получали из уретры, шейки матки, влагалища, ректум, ротоглотки после предварительного удаления видимой слизи стерильным марлевым тампоном. За 3-4 часа перед взятием материала из уретры, рекомендовалось не мочиться. После проведенного массажа уретры в направлении от лона к себе в течение 30-40 секунд, на глубину 1,0-1,5 см в уретру вводилась ложка Фолькмана и надавливающими движениями в направлении от лона к себе по передней стенке уретры производилось взятие материала. Материал из влагалища получали при помощи ложки Фолькмана из заднебоковых сводов. Из цервикального канала материал получали гинекологическим пинцетом или одноразовым урогенитальным зондом с щеточкой («Hawo», Швеция), вводя его на глубину 1,5-2,0 см. Материал из ампулы прямой кишки получали с помощью ложки Фолькмана, выполняя циркулярный соскоб со слизистой оболочки и ее складок на глубине 3-4 см. Материал из ротоглотки получали с помощью ложки Фолькмана или одноразового урогенитального зонда с щеточкой («Hawo», Швеция), выполняя циркулярный соскоб со слизистой оболочки миндалин, верхнего неба, задней стенки глотки /44/.
2.3.4. Определение Gardnerella vaginalis и Lactobacillus spp. методом ПЦР.

Для диагностики бактериального вагиноза, помимо выше указанных методов, использовался ПЦР-анализ - определение ДНК G.vaginalis и Lactobacillus spp. проводилось с использованием набора реагентов «ЛактАм» производства ООО НПФ «Гентех», Москва, ОКПО 56751480. (Рекомендован МЗ РФ к применению в медицинской практике, регистрационное удостоверение № ФС 012а2004/1759-05 от 10 июня 2005 г. действительно до 10 июня 2010 г., код ОКП 93 9817, нормативный документ ТУ 9398-013-56751480-2004). Исследование проводилось в научно-исследовательской лаборатории научно-производственной фирмы ООО «Гентех». Методика позволяет оценить соотношение содержания G. vaginalis и Lactobacillus spp. в одном образце исследуемого материала. В исследовании применялась мультипраймерная ПЦР с двумя парами олигонуклеотидных праймеров: одна из них размером 558 пар нуклеотидов (п.н.) специфична для фрагмента генома лактобацилл (L. Fermentum, L. Acidophilus, L. Plantarum, L. Casei и др.), вторая – для генома гарднереллы размером 820 п.н.. При этом использовались два типа положительных контрольных образцов.



  1. В положительном контрольном образце 1 (ПК1) ДНК должны быть видны две светящиеся полосы розового цвета: нижняя полоса соответствует фрагменту генома лактобацилл размером 558 п.н. в количестве 107 копий/мл, верхняя - фрагменту генома гарднереллы размером 820 п.н. в количестве 106 копий/мл. В положительном контрольном образце 2 (ПК2) ДНК - нижняя полоса соответствует фрагменту генома лактобацилл размером 558 п.н. в количестве 108 копий/мл, верхняя - фрагменту генома гарднереллы размером 820 п.н. в количестве 107 копий/мл.

  2. В отрицательном контрольном образце обе светящиеся полосы розового цвета должны отсутствовать. Появление полос в отрицательном контрольном образце является сигналом некорректно выполненного анализа или загрязнения (контаминация) исходных компонентов комплекта, предназначенного для проведения ПЦР.

  3. В анализируемых образцах, содержащих ДНК лактобацилл в количествах, равных или превышающих 107 копий/мл должна быть видна полоса, соответствующая фрагменту генома лактобацилл размером 558 п.н., по интенсивности равная или превышающая интенсивность свечения полосы ДНК в ПК1. В анализируемых образцах, содержащих ДНК лактобацилл в количествах, равных или превышающих 108 копий/мл должна быть видна полоса, соответствующая фрагменту генома лактобацилл размером 558 п.н., по интенсивности равная или превышающая интенсивность свечения полосы ДНК в ПК2. В образцах, не содержащих ДНК лактобацилл или содержащих ее в количествах менее 107 копий/мл, соответствующая полоса либо отсутствует, либо ее интенсивность меньше интенсивности свечения полосы ДНК в ПК1.

  4. В анализируемых образцах, содержащих ДНК гарднереллы в количествах, равных или превышающих 106 копий/мл, должна быть видна полоса, соответствующая фрагменту генома гарднереллы размером 820 п.н., по интенсивности равная или превышающая интенсивность соответствующей свечению полосы контрольной ДНК в ПК1. В анализируемых образцах, содержащих ДНК гарднереллы в количествах, равных или превышающих 107 копий/мл, должна быть видна полоса, соответствующая фрагменту генома гарднереллы размером 820 п.н., по интенсивности равная или превышающая интенсивность соответствующей свечению полосы контрольной ДНК в ПК2. В образцах, не содержащих ДНК гарднереллы или содержащих ее в количествах менее 106 копий/мл, соответствующая полоса либо отсутствует, либо ее интенсивность меньше интенсивности свечения полосы ДНК в ПК.

  5. Результаты, в которых интенсивность полос лактобацилл больше или равна, а интенсивность полосы гарднереллы меньше свечения полосы ДНК в ПК1, соответствуют показателям нормального микроценоза влагалища для женщин репродуктивного возраста. Результаты, в которых интенсивность полосы лактобацилл меньше интенсивности свечения полосы ДНК в ПК1, а интенсивность полосы гарднереллы больше контрольной ПК1, являются свидетельством наличия бактериального вагиноза у данных пациенток.


2.3.5. Определение Fusobacterium spp., Mobiluncus curtisii, Prevotella

Bivia методом ПЦР.

Использовался набор реагентов для определения ДНК Fusobacterium sp., Mobiluncus curtisii, Prevotella bivia методомПЦР – «АнаэрАм» производства фирмы ООО НПФ «Гентех», Москва, ОКПО 56751480. (Рекомендован МЗ РФ к применению в медицинской практике, регистрационное удостоверение № ФС 012а2001/1763-05 от 10 июня 2005 г. действительно до 10 июня 2010 г., код ОКП 93 9817, нормативный документ ТУ 9398-403-29032954-2001).

В наборе «АнаэрАм» применяется мультипраймерная ПЦР с тремя парами олигонуклеотидных праймеров: одна пара специфична для фрагмента генома Fusobacterium spp. размером 230 пар нуклеотидов (п.н.), вторая - для фрагмента генома Mobiluncus curtisii размером 323 п.н., третья - для фрагмента генома Prevotella bivia размером 454 п.н..

В состав набора «АнаэрАм» входили реагенты аналогичные набору «ЛактАм», но с тремя парами праймеров, специфичными для фрагментов геномов Fusobacterium spp., Mobiluncus curtisii, Prevotella bivia и одним положительным контролем (ПК), содержащим ДНК вышеперечисленных бактерий в количестве 104 копий/мл.

Пробоподготовка, амплификация, электрофорез проводились аналогично проведению ПЦР на наборе «ЛактАм».

Детекция результатов.

1 . В положительном контрольном образце ДНК должны быть видны три светящиеся полосы розового цвета. Нижняя - первая полоса соответствует фрагменту генома Fusobacterium spp. размером 230 п.н. в количестве 104 копий/мл, следующая - фрагменту генома Mobiluncus curtisii размером 323 п.н. в количестве 104 копий/мл, третья - фрагменту генома Prevotella bivia размером 454 п.н. в количестве 104 копий/мл.

2. В отрицательном контрольном образце все светящиеся полосы розового цвета должны отсутствовать. Появление полос в отрицательном контрольном образце является сигналом некорректно выполненного анализа или загрязнения исходных компонентов комплекта, предназначенного для проведения ПЦР.

3. В анализируемых образцах, содержащих ДНК Fusobacterium spp. в количествах, равных или превышающих 104 копий/мл, должна быть видна полоса, соответствующая фрагменту генома Fusobacterium spp. размером 230 п.н., по интенсивности равная или превышающая интенсивность соответствующей свечению полосы контрольной ДНК в ПК. В образцах, не содержащих ДНК Fusobacterium spp. или содержащих ее в количествах менее 104 копий/мл, соответствующая полоса либо отсутствует, либо ее интенсивность меньше интенсивности свечения полосы ДНК в ПК.

4. В анализируемых образцах, содержащих ДНК Mobiluncus curtisii в количествах, равных или превышающих 104 копий/мл, должна быть видна полоса, соответствующая фрагменту генома Mobiluncus curtisii размером 323 п.н., по интенсивности равная или превышающая интенсивность соответствующей свечению полосы контрольной ДНК в ПК. В образцах, не содержащих ДНК Mobiluncus curtisii или содержащих ее в количествах менее 104 копий/мл, соответствующая полоса либо отсутствует, либо ее интенсивность меньше интенсивности свечения полосы ДНК в ПК.

5. В анализируемых образцах, содержащих ДНК Prevotella bivia в количествах, равных или превышающих 104 копий/мл должна быть видна полоса, соответствующая фрагменту генома Prevotella bivia размером 454 п.н., по интенсивности равная или превышающая интенсивность свечения полосы ДНК в ПК. В образцах, не содержащих ДНК Prevotella bivia или содержащих ее в количествах менее 104 копий/мл, соответствующая полоса либо отсутствует, либо ее интенсивность меньше интенсивности свечения полосы ДНК в ПК.

6. Результаты, в которых интенсивность полос Fusobacterium spp., Mobiluncus curtisii, Prevotella bivia меньше или равна свечению полосы ДНК в ПК, соответствуют показателям нормального микроценоза влагалища для женщин репродуктивного возраста. Результаты, в которых интенсивность полос Fusobacterium spp., Mobiluncus curtisii, Prevotella bivia больше интенсивности свечения полосы ДНК в ПК являются косвенным подтверждением бактериального вагиноза у данных пациенток.
2.3.6. Определение Ureaplasma urealyticum методом ПЦР.

Использовался набор реагентов для определения ДНК U. urealyticum методом ПЦР – «УреАм» производства фирмы ООО НПФ «Гентех», Москва, ОКПО 56751480. (Рекомендован МЗ РФ к применению в медицинской практике, регистрационное удостоверение № 29/24040403/5587-03 от 22 августа 2003 г. действительно до 21 апреля 2008 г., код ОКП 93 9817, нормативный документ ТУ 9398-003-56751480-2003).

В наборе «УреАм» применяется монопраймерная ПЦР с одной парой олигонуклеотидных праймеров специфичной для фрагмента генома U. urealyticum размером 466 пар нуклеотидов (п.н.).

В состав набора «УреАм» входили реагенты аналогичные набору «ЛактАм», но с одной парой праймеров U. urealyticum и одним положительным контролем (ПК), содержащим ДНК U. urealyticum в количестве 104 копий/мл.

Пробоподготовка, амплификация, электрофорез проводились аналогично проведению ПЦР на наборе «ЛактАм».

Детекция результатов.

1 . В положительном контрольном образце ДНК должны быть видна одна светящаяся полоса розового цвета, соответствующая фрагменту генома U. urealyticum размером 466 пар нуклеотидов (п.н.) в количестве 104 копий/мл.

2. В отрицательном контрольном образце светящиеся полосы розового цвета должны отсутствовать. Появление полос в отрицательном контрольном образце является сигналом некорректно выполненного анализа или загрязнения исходных компонентов комплекта, предназначенного для проведения ПЦР.

3. В анализируемых образцах, содержащих ДНК U. urealyticum в количествах, равных или превышающих 104 копий/мл, должна быть видна полоса, соответствующая фрагменту генома U. urealyticum размером 466 пар нуклеотидов (п.н.), по интенсивности равная или превышающая интенсивность соответствующей свечению полосы контрольной ДНК в ПК. В образцах, не содержащих ДНК U. urealyticum или содержащих ее в количествах менее 104 копий/мл, соответствующая полоса либо отсутствует, либо ее интенсивность меньше интенсивности свечения полосы ДНК в ПК.

4. Результаты, в которых интенсивность полосы U. urealyticum меньше или равна свечению полосы ДНК в ПК, соответствуют показателям нормального микроценоза влагалища для женщин репродуктивного возраста. Результаты, в которых интенсивность полосы U. urealyticum больше интенсивности свечения полосы ДНК в ПК являются положительными, те в данном образце количество U. urealyticum более 104 копий/мл – более нормы.
2.3.7. Определение Mycoplasma hominis методом ПЦР.

Использовался набор реагентов для определения ДНК M. hominis методом ПЦР – «МикгАм» производства фирмы ООО НПФ «Гентех», Москва, ОКПО 56751480. (Рекомендован МЗ РФ к применению в медицинской практике, регистрационное удостоверение № 29/24050503/5584-03 от 22 августа 2003 г. действительно до 19 мая 2008 г., код ОКП 93 9817, нормативный документ ТУ 9398-004-56751480-2003).

В наборе «МикгАм» применяется монопраймерная ПЦР с одной парой олигонуклеотидных праймеров специфичной для фрагмента генома М. hominis размером 374 пар нуклеотидов (п.н.).

В состав набора «МикгАм» входили реагенты аналогичные набору «ЛактАм», но с одной парой праймеров M. hominis и одним положительным контролем (ПК), содержащим ДНК M. hominis в количестве 104 копий/мл.

Пробоподготовка, амплификация, электрофорез проводились аналогично проведению ПЦР на наборе «ЛактАм».

Детекция результатов.

1 . В положительном контрольном образце ДНК должны быть видна одна светящаяся полоса розового цвета, соответствующая фрагменту генома M. hominis размером 374 пар нуклеотидов (п.н.) в количестве 104 копий/мл.

2. В отрицательном контрольном образце светящиеся полосы розового цвета должны отсутствовать. Появление полос в отрицательном контрольном образце является сигналом некорректно выполненного анализа или загрязнения исходных компонентов комплекта, предназначенного для проведения ПЦР.

3. В анализируемых образцах, содержащих ДНК M. hominis в количествах, равных или превышающих 104 копий/мл, должна быть видна полоса, соответствующая фрагменту генома M. hominis размером 374 пар нуклеотидов (п.н.), по интенсивности равная или превышающая интенсивность соответствующей свечению полосы контрольной ДНК в ПК. В образцах, не содержащих ДНК M. hominis или содержащих ее в количествах менее 104 копий/мл, соответствующая полоса либо отсутствует, либо ее интенсивность меньше интенсивности свечения полосы ДНК в ПК.



  1. Результаты, в которых интенсивность полосы M. hominis меньше или равна свечению полосы ДНК в ПК, соответствуют показателям нормального микроценоза влагалища для женщин репродуктивного возраста. Результаты, в которых интенсивность полосы M. hominis больше интенсивности свечения полосы ДНК в ПК являются положительными, те в данном образце количество Mycoplasma hominis более 104 копий/мл – более нормы.


2.3.8. Определение Chlamydia trachomatis методом ПЦР.

Использовался набор реагентов для определения ДНК C. trachomatis методом ПЦР – «ХламАм» производства фирмы ООО НПФ «Гентех», Москва, ОКПО 56751480. (Рекомендован МЗ РФ к применению в медицинской практике, регистрационное удостоверение №ФС 012а2001/1761-05 от 10 июня 2005 г. действительно до 10 июня 2010 г., код ОКП 93 9817, нормативный документ ТУ 9398-404-29032954-2001).

В наборе «ХламАм» применяется монопраймерная ПЦР с одной парой олигонуклеотидных праймеров специфичной для фрагмента генома C. trachomatis размером 316 пар нуклеотидов (п.н.).

В состав набора «ХламАм» входили реагенты аналогичные набору «ЛактАм», но с одной парой праймеров C. trachomatis и одним положительным контролем (ПК), содержащим ДНК C. trachomatis в количестве 102 копий/мл.

Пробоподготовка, амплификация, электрофорез проводились аналогично проведению ПЦР на наборе «ЛактАм».

Детекция результатов.

1 . В положительном контрольном образце ДНК должны быть видна одна светящаяся полоса розового цвета, соответствующая фрагменту генома C. trachomatis размером 316 пар нуклеотидов (п.н.) в количестве 102 копий/мл.

2. В отрицательном контрольном образце светящиеся полосы розового цвета должны отсутствовать. Появление полос в отрицательном контрольном образце является сигналом некорректно выполненного анализа или загрязнения исходных компонентов комплекта, предназначенного для проведения ПЦР.

3. В анализируемых образцах, содержащих ДНК C. trachomatis в количествах, равных или превышающих 102 копий/мл, должна быть видна полоса, соответствующая фрагменту генома C. trachomatis размером 316 пар нуклеотидов (п.н.), по интенсивности равная или превышающая интенсивность соответствующей свечению полосы контрольной ДНК в ПК. В образцах, не содержащих ДНК C. trachomatis или содержащих ее в количествах менее 102 копий/мл, соответствующая полоса либо отсутствует, либо ее интенсивность меньше интенсивности свечения полосы ДНК в ПК.



2.3.9. Статистические методы.

В ходе работы были составлены таблицы сопряжения (частотные таблицы), данные которых обрабатывали с помощью статистического анализа категорированных данных. Значимость различий относительных величин частоты в рассматриваемых группах оценивали по t-критерию Стьюдента. Различия считали достоверными при уровне значимости р≤0,05 / 45,78,81/.




Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Особенности клиники и течения бактериального вагиноза у обследованных женщин.

3.1.1. Анализ жалоб и клинических симптомов.

Как видно из представленных клинических данных в таблицах 8 и 9, у женщин контрольной группы во всех случаях жалобы на зуд, жжение в области наружных половых органов и уретры, наличие запаха или повышенного количества влагалищных выделений, ощущение дискомфорта в области гениталий и тазовые боли отсутствовали. Слизистая оболочка влагалища и вульвы у них была розового цвета, а выделения из влагалища – скудные (52,07,2%), белого цвета (94,08,7%), гомогенные (1008,9%) и вязкие (84,08,7%) (таблица 9а).

Совершенно другая картина наблюдалась у пациенток I-III групп с наличием бактериального вагиноза. (таблица 8а) В I группе чаще встречались жалобы на повышенное количество выделений из половых путей и «рыбный» запах вагинальных выделений - (73,37,4%) по сравнению с другими жалобами, при этом на втором месте по частоте – жалобы на зуд и жжение в области влагалища (16,72,3%), дизурические явления (10,00,6%), ощущение дискомфорта в области гениталий (23,32,9%), дисменорея и меноррагия (10,00,6%), (р0,05). Во II группе чаще встречались жалобы на повышенное количество выделений из половых путей, зуд/жжение в области влагалища и вульвы, ощущение дискомфорта в области гениталий - (91,715,5%), при этом на втором месте по частоте – жалобы на «рыбный» запах вагинальных выделений и дизурические явления - (41,713,9%), диспареунию (58,314,2%), (р0,05).

Таблица 8а
Характер жалоб у обследованных женщин. (по каждой группе)

Жалобы

I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная


Группа

(n=50)


Повышенное количество выделений из половых путей

22 (73,3±7,4%)*

11(91,7±15,5%)*

33 (61,1±7,0%)*

0(1,0±0,06)


“Рыбный” запах вагинальных выделений

22 (73,3±7,4%)*

5 (41,7±13,9%)

14 (25,9±5,9%)

0(1,0±0,06)


Тазовые боли

0(1,7±0,1%)

0(4,2±0,3%)

33 (61,1±7,0%)*

0(1,0±0,06)


Зуд/жжение в области влагалища, вульвы

5 (16,7±2,3%)

11(91,7±15,5%)*

18 (33,3±6,1%)

0(1,0±0,06)


Дизурия

3 (10,0±0,6%)

5 (41,7±13,9%)

23 (42,6±6,2%)

0(1,0±0,06)


Диспареуния

0(1,7±0,1%)

7 (58,3±14,2%)

23 (42,6±6,2%)

0(1,0±0,06)


Ощущение дискомфорта в области гениталий

7 (23,3±2,9%)

11(91,7±15,5%)*

38(70,4±11,2%)*

0(1,0±0,06)


- Кровотечения посткоитальные

- Кровотечения межменструальные



0(1,7±0,1%)

1 (3,3±0,2%)



0(4,2±0,3%)

0(4,2±0,3%)



12 (22,2±5,4%)

2 (3,7±0,1%)



0(1,0±0,06)

2 (4,0±0,2%)



Дисменорея и меноррагия

3 (10,0±0,6%)

2 (16,7±5,2%)

14 (25,9±5,9%)

5 (10,0±0,8%)

* - различия достоверны, р < 0,05


Таблица 8б
Характер жалоб у обследованных женщин. (по каждой жалобе)

Жалобы

I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная


Группа

(n=50)


Повышенное количество выделений из половых путей (n=66)

22 (33,3±5.8%)*

11 (16,7±4,1%)

33 (50,0±6,2%)*

0(0,8±0,07)


«Рыбный» запах вагинальных выделений (n=41)

22 (53,7±7,8%)*

5 (12,2±2,2%)

14 (34,1±6,4%)*

0(1,2±0,1)


Тазовые боли (n=33)

0(1,5±0,1%)

0(1,5±0,1%)

33(98,8±12,3%)*

0(1,5±0,1)


Зуд/жжение в области влагалища, вульвы (n=34)

5 (14,7±6,1%)

11 (32,4±8,0%)

18 (52,9±8,5%)*

0(1,5±0,2)


Дизурия (n=31)

3 (9,7±1,2%)

5 (16,1±3,5%)

23 (74,2±7,8%)*

0(1,6±0,2)


Диспареуния (n=30)

0(1,7±0,2%)

7 (23,3±5,2%)

23 (76,7±8,3%)*

0(1,7±0,2)


Ощущение дискомфорта в области гениталий (n=56)

7 (12,5±2,9%)

11 (19,6±4,1%)

38 (67,9±6,2%)*

0(0,9±0,07)


- Кровотечения посткоитальные (n=12)

- Кровотечения межменструальные (n=5)



0(4,2±1,0%)

1 (20,0±5,1%)



0(4,2±1,0%)

0(10±3,6%)



12 (95,8±5,8%)*

2 (40,0±11,3%)



0(4,2±1,0%)

2 (40,0±11,3%)



Дисменорея и меноррагия (n=24)

3 (12,5±3,2%)

2 (8,3±1,8%)

14(58,3±10,1%)*

5 (20,8±4,9%)


* - различия достоверны, р < 0,05

В III группе чаще встречались жалобы на повышенное количество выделений из половых путей и тазовые боли - (61,17,0%), ощущение дискомфорта в области гениталий (70,411,2%), при этом на втором месте по частоте – жалобы на «рыбный» запах вагинальных выделений (25,95,9%), зуд/жжение в области влагалища и вульвы (33,36,1%), дизурические явления и диспареунию - (42,66,2%), посткоитальные кровотечения (22,25,4%), дисменорею и меноррагию (25,95,9%), (р0,05).

Таким образом (таблица 8б), чаще повышенным количеством выделений из половых путей, а также «рыбным» запахом вагинальных выделений страдали пациентки I и III групп (33,3±5,8% и 50,0±6,2%, а также 53,7±7,8% и 34,1±6,4%, соответственно, р<0,05) по сравнению со II и контрольной группами. При этом жалобы на тазовые боли (98,8±12,3%), зуд/жжение в области влагалища (52,9±8,5%), дизурию (74,2±7,8%), диспареунию (76,7±8,3%), ощущение дискомфорта в области гениталий (67,9±6,2%), посткоитальные кровотечения (95,8±5,8%), дисменорею и меноррагии (58,3±10,1%) у женщин III группы встречались чаще, чем в I, II и контрольной группах, (р<0,05). Достоверных отличий между группами по частоте межменструальных кровотечений не было.

Следует особо обратить внимание на то, что 72 (75,0%) женщины из I-III групп имели перечисленные жалобы в течение 1-2 месяцев до момента обращения в клинику и только 31 (32,3%) женщина с дизурией обратилась на 3-7 сутки к врачу, а также что 22 (22,9%) пациентки не предъявляли никаких из вышеуказанных жалоб, хотя при этом имели патологический характер выделений из половых путей, (р<0,05).

Поэтому при клиническом обследовании мы не только выясняли особенности субъективных ощущений, но и проводили тщательный общий и гинекологический осмотр с изучением состояния слизистых оболочек урогенитального тракта, качества и количества вагинального отделяемого. С этой целью проводились: бимануальное исследование, осмотр влагалища и шейки матки с помощью влагалищных зеркал, ультразвуковое исследование.

Как видно из таблицы 9а, клинические проявления у больных бактериальным вагинозом носили весьма разнообразный характер. Так, в I группе чаще наблюдались обильные (86,78,3%), с «рыбным» запахом (73,37,4%), серо-белого цвета (70,07,4%), гомогенные (1003,1%), жидкие (80,07,8%) выделения из половых путей. При осмотре слизистых оболочек половых органов чаще всего выявлялась гиперемия влагалища (53,35,7%), (р<0,05).

Во II группе чаще наблюдались обильные (91,715,5%), белого цвета (58,314,2%), негомогенные (91,715,5%), с творожистыми включениями (66,714,5), жидкие (91,715,5%) выделения из половых путей. При осмотре слизистых оболочек половых органов чаще выявлялась гиперемия влагалища (83,315,2%), (р<0,05).

В III группе чаще наблюдались умеренные (66,77,5%), желто-белого цвета (68,58,3%), гомогенные (70,411,2%), вязкие (70,411,2%) выделения из половых путей. При осмотре слизистых оболочек половых органов чаще выявлялась гиперемия влагалища (48,16,7%) и шейки матки (59,37,1%), а также отмечалась контактная кровоточивость шейки матки (50,06,4%). При бимануальном осмотре чаще в данной группе женщин отмечалась болезненность и увеличение придатков матки, наличие спаечного процесса в малом тазу (51,96,6% и 70,411,2%, соответственно), (р<0,05).

Таким образом, чаще (таблица 9б) гиперемия и отечность слизистой влагалища встречалась в III и I группе (50±6,9% и 30,8±6,4%, соответственно). Гиперемия и отечность слизистой шейки матки чаще всего обнаруживали у женщин III группы (76,2±8,1%), в I группе данный симптом встречался реже (23,8±5,1%), но чаще, чем во II (1,2±0,3%). Статистически значимых различий между группами по гиперемии и отечности вульвы и области наружного отверстия уретры обнаружено не было, (р<0,05). По-видимому, это обусловлено важной ролью ИППП в развитии эндоцервицита.

Контактной кровоточивостью шейки матки страдали в подавляющем большинстве пациентки III группы (87,1±6,0%). Также у женщин III группы чаще, чем в I и II группах, отмечались такие клинические симптомы, как болезненность и увеличение придатков, наличие спаечного процесса в малом тазу (84,8±6,2% и 76,0±6,0%, соответственно) по сравнению с другими группами, (р<0,05).

При сравнительном анализе характера вагинального отделяемого было выявлено, что обильные выделения чаще отмечали в I группе, чем во II и III (46,4±6,7%, 19,6±4,1% и 21,4±4,6%, соответственно, р<0,05), при этом в III и контрольной группах у большего числа женщин отмечались умеренные выделения (62,1±6,4% и 29,3±4,2%, соответственно) по сравнению с другими группами бактериального вагиноза. Скудные выделения – статистически достоверная характеристика вагинального отделяемого женщин контрольной группы (81,26,9%). «Рыбный» запах выделений значительно чаще встречался в I и III группах (53,7±7,8% и 34,1±4,4%, соответственно). Цвет выделений в I группе чаще был серо-белым (72,4±8,3%), а в III группе желто-белым (88,0±4,9%) и желто-зеленым (90,0±13,4%), тогда как в контрольной он был белым (67,1±5,6%), (р<0,05).

Таблица 9а

Анализ клинических симптомов у обследованных женщин. (по каждой группе)

Клинические симптомы


I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная

Группа (n=50)


Гиперемия и отечность слизистой:

- вульвы


- влагалища

- шейки матки

- в области наружного отверстия уретры




-

16 (53,35,7%)

10 (33,33,2%)

10 (33,33,2%)

4 (33,313,6%)

10 (83,315,2%)*

-

4 (33,313,6%)


2 (3,70,1%)

26 (48,16,7%)*

32 (59,37,1%)*

12 (22,25,4%)

-

-



-

-


Контактная кровоточивость шейки матки

4 (13,31,6%)

-

27 (50,06,4%)*

-


Количество выделений:

  • Обильные

  • Умеренные

  • Скудные

26 (86,78,3%)*

4 (13,31,6%)

-

11 (91,715,5%)*

1 (8,30,8%)

-

12 (22,25,4%)

36 (66,77,5%)*

6 (11,12,6%)


7 (14,01,2%)

17 (34,06,6%)

26 (52,07,2%)*



“Рыбный” запах выделений:

22 (73,37,4%)*

5 (41,713,9%)

14 (25,95,9%)

-

Цвет выделений :

- белый


  • Серо-белый

  • Желто-белый

  • Желто-зеленый

9 (30,03,1%)

21 (70,07,4%)*

-

-


7 (58,314,2%)*

3 (25,08,6%)

2 (16,75,2%)

-


7 (12,92,7%)

5 (9,31,8%)

37 (68,58,3%)*

5 (9,31,8%)



47 (94,08,7%)*

-

3 (6,00,3%)



-

Гомогенность выделений:

- гомогенные

- негомогенные

- наличие творожистых включений


30 (1003,1%)*

-

-



1 (8,30,8%)

11 (91,715,5%)*

8 (66,714,5%)*

38 (70,411,2%)*

16 (29,66,0%)

-

50 (1008,9%)*

-

-


* - различия достоверны, р < 0,05



Таблица 9а (продолжение)

Клинические симптомы


I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная

Группа (n=50)


Вязкость выделений:

- вязкие


- жидкие

6 (20,02,4%)

24 (80,07,8%)*

1 (8,30,8%)

11 (91,715,5%)*

38 (70,411,2%)*

16 (29,66,0%)

42 (84,08,7%)*

8 (16,03,1%)


Болезненность и увеличение придатков матки

4 (13,31,6%)

1 (8,30,8%)

28 (51,96,6%)*

-


Наличие спаечного процесса в м/ тазу

4 (13,31,6%)

1 (8,30,8%)

38(70,4 11,2%)*

7 (14,01,2%)


Наличие миомы матки

1 (3,30,2%)

-

3 (5,60,3%)

2 (4,00,2%)


Наличие кисты яичника

1 (3,30,2%)

-

4 (7,40,9%)

1 (2,00,1%)

* - различия достоверны, р < 0,05



Таблица 9б.

Анализ клинических симптомов у обследованных женщин. (по каждому клин. симптому)

Клинические симптомы


I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная

Группа (n=50)


Гиперемия и отечность слизистой:

- вульвы (n=6)

- влагалища(n=52)

- шейки матки(n=42)

- в области наружного отверстия уретры(n=26)

0(8,3±1,8%)

16 (30,8±6,4%)*

10 (23,8±5,1%)*

10 (38,5±9,5%)

4 (66,7±13,2%)

10 (19,2±4,2%)

0(1,2±0,3%)

4 (15,4±3,5%)


2 (33,3±13,2%)

26 (50±6,9%)*

32 (76,2±8,1%)*

12 (46,2±9,8%)



0(8,3±1,8%)

0(0,9±0,08%)

0(1,2±0,3%)

0(1,9±0,4%)



Контактная кровоточивость шейки матки(n=31)

4 (12,9±2,7%)

0(1,6±0,2%)

27 (87,1±6,0%)*

0(1,6±0,2%)


Количество выделений:

  • Обильные(n=56)

  • Умеренные(n=58)

  • Скудные(n=32)

26 (46,4±6,7%)*

4 (6,8±1,2%)

0(1,5±0,3%)


11 (19,6±4,1%)

1 (1,7±0,5%)

0(1,5±0,3%)


12 (21,4±4,6%)

36 (62,1±6,4%)*

6 (18,8±4,0%)

7 (12,5±3,0%)

17 (29,3±4,2%)*

26 (81,2±6,9%)*



«Рыбный» запах выделений: (n=41)

22 (53,7±7,8%)*

5 (12,2±3,0%)

14 (34,1±4,4%)*

0(1,2±0,2%)

Цвет выделений :

  • Белый(n=70)

  • Серо-белый(n=29)

  • Желто-белый(n=42)

  • Желто-зеленый(n=5)

9 (12,9±3,1%)

21 (72,4±8,3%)*

0(1,2±0,3%)

0(10±2,1%)



7 (10±2,0%)

3 (10,3±2,2%)

2 (4,8±0,8%)

0(10±2,1%)



7 (10±2,0%)

5 (17,2±3,6%)

37 (88±4,9%)*

5 (90±13,4%)*



47 (67,1±5,6%)*

0(1,7±0,4)

3 (7,1±1,9%)

0(10±2,1%)



Гомогенность выделений:

- гомогенные(n=119)



  • Негомогенные(n=27)

Наличие творожистых включений(n=8)

30 (25,2±3,9%)*

0(1,8±0,4%)

0(6,25±1,7)


1 (0,8±0,1%)

11 (40,7±9,4%)*

8 (93,8±8,6%)*


38 (31,9±4,3%)*

16 (59,2±9,4%)*

0(6,25±1,7%)

50 (42±4,5%)*

0(1,8±0,4)

0(6,25±17%)


* - различия достоверны, р < 0,05


Таблица 9б (продолжение).

Клинические симптомы


I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная

Группа (n=50)


Вязкость выделений:

  • Вязкие(n=87)

- жидкие(n=59)

6 (6,9±1,8%)

24 (40,7±6,4%)*

1 (1,1±0,2%)

11 (18,6±3,8%)

38 (43,7±5,3%)*

16 (27,1±4,7%)

42 (48,3±5,4%)*

8 (13,6±2,7%)


Болезненность и увеличение придатков матки (n=33)

4 (12,1±2,6%)

1 (3,3±1,2%)

28 (84,8±6,2%)*

0(1,5±0,3%)


Наличие спаечного процесса в

Малом тазу (n=50)


4 (8,0±1,7%)

1 (2,0±0,3%)

38 (76±6,0%)*

7 (14±3,5%)


Наличие миомы матки (n=6)

1 (16,7±3,5%)

0(8,3±1,8%)

3 (50±12,1%)

2 (33,3±8,1%)


Наличие кисты яичника (n=6)

1 (16,7±3,5%)

0(8,3±1,8%)

4 (66,7±13,2%)

1 (16,7±3,5%)


* - различия достоверны, р < 0,05


Гомогенные выделения встречались чаще в I, III и контрольной группах, чем во II (25,2±3,9%, 31,9±4,3%, 42,0±4,5%, чем 0,8±0,1%, соответственно, р<0,05), а негомогенные – во II и III, нежели в I (40,7±9,4%, 59,2±9,4%, чем 1,8±0,4%, соответственно, р<0,05). Наличие творожистых включений было характерно только для вагинального отделяемого женщин II группы (93,8±8,6%). Вязкие выделения чаще встречались в III и контрольной группах (43,7±5,3% и 48,3±5,4%, соответственно), а жидкие в I группе (40,7±6,4%), (р<0,05). Статистически достоверных различий между группами по таким клиническим симптомам, как наличие миомы матки и кисты яичника не было.

Как видно из приведенных данных зуд, жжение наружных половых органов, появление «рыбного» запаха и увеличение количества вагинального отделяемого, а также наличие гиперемии и отека слизистой оболочки вульвы и влагалища встречались во всех группах бактериального вагиноза. В то же время, у 26,0% женщин заболевание протекало в стертой, малосимптомной или бессимптомной форме. Таким образом, при скрининговой диагностике невозможно полагаться только на визуальную оценку вагинального отделяемого и состояния слизистых оболочек урогенитального тракта и, следовательно, необходимо применение дополнительных лабораторно-диагностических методов, доступных для быстрого выполнения в амбулаторных условиях.


3.1.2. Анализ результатов микроскопического исследования мазков вагинального отделяемого по Граму.

По результатам (таблица 10а) микроскопического исследования мазков по Граму вагинального отделяемого женщин I группы выявлены следующие характерные особенности: положительный аминотест (80,07,8%), значения рН 4,5-6 (70,07,4), лейкоциты единичные в препарате (56,76,3%) и менее 10 в поле зрения (30,03,1%), эпителиальные клетки в малом (53,35,7%) и умеренном (33,33,2%) количестве, «ключевые» клетки (93,38,7%), общее количество микроорганизмов массивное (63,37,2%), доминирующие морфотипы микроорганизмов – гарднереллы и (грам «+», грам «-», грамвариабельные) палочки (70,07,4% и 63,37,2%, соответственно, р < 0,05).

По результатам (таблица 10а) микроскопического исследования мазков по Граму вагинального отделяемого женщин II группы выявлены следующие характерные особенности: положительный аминотест (75,014,9%), значения рН 4,5-6 (75,014,9%), лейкоциты более 20 в поле зрения (83,315,2%), эпителиальные клетки в большом количестве (75,014,9%), “ключевые” клетки (83,315,2%), общее количество микроорганизмов массивное (83,315,2%), доминирующие морфотипы микроорганизмов – (грам «+», грам «-», грамвариабельные) палочки и дрожжеподобные грибы (75,014,9% и 91,715,5%, соответственно). (р < 0,05).

По результатам (таблица 10а) микроскопического исследования мазков по Граму вагинального отделяемого женщин III группы выявлены следующие характерные особенности: положительный аминотест (75,911,6%), значения рН 4,5-6 (62,97,0%), лейкоциты 10-20 в поле зрения (59,37,1%), эпителиальные клетки в большом количестве (50,06,4%), “ключевые” клетки (79,614,1%), общее количество микроорганизмов большое (70,411,2%), доминирующие морфотипы микроорганизмов – гарднереллы (70,411,2%), (р < 0,05).

По результатам (таблица 10а) микроскопического исследования мазков по Граму вагинального отделяемого женщин контрольной группы выявлены следующие характерные особенности: отрицательный аминотест (100%), значения рН менее 4,5 (84,08,7%), лейкоциты менее 10 в поле зрения (76,08,1%), эпителиальные клетки в умеренном количестве (72,07,8%), общее количество микроорганизмов умеренное (92,08,6%), доминирующие морфотипы микроорганизмов – лактобактерии (84,08,7%), (р < 0,05).

Таким образом, были выявлены следующие статистически значимые различия по анализируемым признакам между группами (таблица 10б). Положительный аминотест и увеличение значения рН во II группе встречались у меньшего числа обследованных, по сравнению с I и III группами, (р0,05).

При анализе лейкоцитарной реакции (таблица 10б) было статистически выявлено, что единичные лейкоциты в препарате – характерный признак классической формы бактериального вагиноза (I группа) (70,89,3%), количество лейкоцитов менее 10 в поле зрения – нормальной микрофлоры влагалища (контрольная группа) (73,16,2%), количество лейкоцитов от 10 до 20 в поле зрения – для бактериального вагиноза в ассоциации с патогенными и/или условно-патогенными возбудителями инфекций урогенитального тракта (III группы) (74,46,7%), количество лейкоцитов более 20 в поле зрения – для бактериального вагиноза в ассоциации с кандидозным вульвовагинитом и патогенными и/или условно-патогенными возбудителями инфекций урогенитального тракта (II и III группы) (37,06,1% и 63,09,3% соответственно, р0,05).

Эпителиальные клетки в мазке по Граму в малом количестве чаще встречались в I и III группах (55,29,2% и 34,56,2% соответственно), в умеренном количестве – в III и контрольной группах (25,84,2% и 54,56,1% соответственно), в большом количестве – для III группы (52,97,0%) по сравнению с другими группами, (р0,05).

«Ключевые» клетки были выявлены в достоверно больших количествах во всех трех группах бактериального вагиноза (34,64,6%, 12,32,5%, 53,15,5% соответственно) по сравнению с контрольной группой (0,60,09%), (р0,05).

Таблица 10а.

Результаты микроскопического исследования

мазков по Граму вагинального отделяемого. (по каждой группе)

Анализируемые признаки


I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная


Группа (n=50)

Положительный аминотест

24 (80,07,8%)*

9 (75,014,9%)*

41(75,911,6%)*

-


РН вагинального отделяемого

 4,5 (норма)

4,5-6

6


2 (6,70,5%)

21 (70,07,4%)*

7 (23,32,9%)


1 (8,30,8%)

9 (75,014,9%)*

2 (16,75,2%)


10 (18,54,6%)

34 (62,97,0%)*

10 (18,54,6%)

42 (84,08,7%)*

8 (16,03,1%)

-


Лейкоциты:

Единичные в препарате



<10 в поле зрения

10-20 в поле зрения

> 20 в поле зрения


17 (56,76,3%)*

9 (30,03,1%)*

4 (13,31,6%)

-


-

-

2 (16,75,2%)



10(83,315,2%)*

-

5 (9,31,8%)

32 (59,37,1%)*

17 (31,56,0%)


7 (14,01,2%)

38 (76,08,1%)*

5 (10,00,8%)

-


Эпителиальные клетки:

в малом количестве

в умеренном количестве

в большом количестве



16 (53,35,7%)*

10 (33,33,2%)*

4 (13,31,6%)


-

3 (25,08,6%)

9 (75,014,9%)*


10 (18,54,6%)

17 (31,56,0%)

27 (50,06,4%)*

3 (6,00,3%)

36 (72,07,8%)*

11 (22,04,3%)



“ключевые клетки”

28 (93,38,7%)*

10(83,315,2%)*

43(79,614,1%)*

-


Общее количество микроорганизмов:

Скудное (до 10 в п/зр)

Умеренное (10-102 в п/зр)

Большое (102 –103)

Массивное ( >103 в п/зр)

-

-

11 (36,73,4%)

19 (63,37,2%)*

-

-

2 (16,75,2%)

10(83,315,2%)*

-

-

38(70,411,2%)*

16 (29,66,0%)

-

46 (92,08,6%)*

4 (8,00,5%)

-

* - различия достоверны, р < 0,05



Таблица 10а (продолжение).

Анализируемые признаки


I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная


Группа (n=50)

Доминирующие морфотипы микр-ов:

Лактобактерии

Гарднереллы

Другие палочки (грам “+”, грам “-”,

Грамвариабельные)

Кокки (грамположительные)

Дрожжеподобные грибы

Мобилункус

Трихомонады

-

21 (70,07,4%)*

19 (63,37,2%)*

7 (23,32,9%)

-

6 (20,02,4%)

-

-

5 (41,713,9%)

9 (75,014,9%)*

5 (41,713,9%)

11(91,715,5%)*

-

-

16 (29,66,0%)

38(70,411,2%)*

17 (31,56,0%)

19 (35,26,3%)

-

-

-

42 (84,08,2%)*

-

11 (22,04,3%)

7 (14,01,2%)

-

-

-

* - различия достоверны, р < 0,05



Таблица 10б.

Результаты микроскопического исследования

мазков по Граму вагинального отделяемого. (по каждому анализир. признаку)


Анализируемые признаки


I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная


Группа (n=50)

Положительный аминотест: (n= 74)

24 (32,4±5,4%)*

9 (12,2±3,8%)

41 (55,4±5,8%)*

0(0,7±0,1%)


РН вагинального отделяемого

 4,5 (норма) (n=55)

4,5-6 (n=72)

6 (n=19)



2(3,6±1,0%)

21(29,2±5,3%)*

7 (36,8±5,8%)


1 (1,8±0,4%)

9 (12,5±3,1%)

2 (10,5±2,5%)


10 (18,2±3,6%)*

34 (47,2±5,8%)*

10 (52,6±6,6%)*

42 (76,4±5,7%)*

8 (11,1±3,0%)

0(2,6±0,8%)



Лейкоциты:

Единичные в препарате (n=24)



<10 в поле зрения (n=52)

10-20 в поле зрения (n=43)

> 20 в поле зрения (n=27)


17 (70,8±9,3%)*

9 (17,3±3,3%)

4 (9,3±2,1%)

0(1,9±0,4%)



0(2,1±0,5%)

0(1,0±0,2%)

2 (4,7±1,1%)

10 (37±6,1%)*



0(2,1±0,5%)

5 (9,6±2,0%)

32 (74,4±6,7%)*

17 (63±9,3%)*


7 (29,2±3,8%)

38 (73,1±6,2%)*

5 (11,6±2,6%)

0(1,9±0,4%)


Эпителиальные клетки:

в малом количестве (n= 29)

в умеренном количестве (n=66)

в большом количестве (n=51)



16 (55,2±9,2%)*

10 (15,2±3,6%)

4 (7,8±1,5%)


0(1,7±0,3%)

3 (4,5±0,8%)

9 (17,6±3,1%)


10 (34,5±6,2%)*

17 (25,8±4,2%)*

27 (52,9±7,0%)*

3 (10,3±2,3%)

36 (54,5±6,1%)*

11 (21,6±3,6%)



“ключевые клетки” (n=81)

28 (34,6±4,6%)*

10 (12,3±2,5%)*

43 (53,1±5,5%)*

0(0,6±0,09%)

* - различия достоверны, р < 0,05


Таблица 10б (продолжение).


Анализируемые признаки


I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная


Группа (n=50)

Общее количество микроорганизмов:

Скудное (до 10 в п/зр) (n=0)

Умеренное (10-102 в п/зр) (n=46)

Большое (102 –103) (n=55)

Массивное ( >103 в п/зр) (n=45)


0

0(1,1±0,2%)

11 (20±4,1%)*

19 (42,2±6,2%)*

0

0(1,1±0,2%)

2 (3,6±1,0%)

10 (22,2±4,1%)*

0

0(1,1±0,2%)

38 (69,1±6,2%)*

16 (35,6±5,3%)*

0

46 (98,9±5,4%)*

4 (7,3±2,2%)

0(1,1±0,2%)


Доминирующие морфотипы

Микроорганизмов:

Лактобактерии (n=58)

Гарднереллы (n=64)

Другие палочки (грам “+”, грам “-”,

Грамвариабельные) (n=56)

Кокки (грамположительные) (n=38)

Дрожжеподобные грибы (n=14)

Мобилункус (n=6)

Трихомонады (n=0)


0(0,9±0,1%)

28(43,8±5,7%)*

19 (33,9±6,3%)

7 (18,4±3,8%)

0(3,6±1,0%)

6 (91,7±11,3%)*

0

0(0,9±0,1%)

5 (7,8±2,0%)

9 (16,1±3,1%)

5 (13,1±2,7%)

11(78,6±10,9%)*

0(8,3±2,2%)

0

16 (27,6±4,1%)

38 (59,4±6,1%)*

17 (30,4±6,1%)

19 (50±8,1%)*

3 (21,4±4,9%)

0(8,3±2,2%)

0

42 (72,4±5,9%)*

0(0,8±0,06%)

11 (19,6±4,1%)

7 (18,4±3,2%)

0(3,6±1,0%)

0(8,3±2,2%)

0


* - различия достоверны, р < 0,05

Анализируя общее количество микроорганизмов в мазке, было выявлено большее их количество во всех трех группах бактериального вагиноза (большое – в I группе 20,04,1% и в III группе 69,16,2%; массивное в I группе – 42,26,2%, во II – 22,24,1%, в III – 35,6 5,3%) по сравнению с контрольной группой, в которой чаще было выявлено умеренное количество микроорганизмов в мазках (98,95,4%), (р0,05).

Лактобактерии, как доминирующий морфотип микроорганизмов, чаще выявлялись в контрольной группе (72,45,9%) по сравнению с другими группами, (р0,05).

Гарднереллы, как доминирующий морфотип микроорганизмов, чаще были выявлены в I и III группах женщин (43,85,7% и 59,46,1%, соответственно) по сравнению с II и контрольной группами (7,82,0 и 0,80,09, соотвественно). Также чаще по сравнению с другими группами в III группе женщин выявлялись грамположительные кокки (50,08,1%), (р0,05).

Дрожжеподобные грибы, как доминирующий морфотип микроорганизмов, являлись характерным признаком мазков вагинального отделяемого женщин II группы (78,610,9%), а мобилункус – I группы (91,7 11,3%), (р0,05).


3.1.3. Сравнительный анализ результатов культурального исследования и метода ПЦР для определения Lactobacillus spp., G. vaginalis, Prevotella bivia, Mobiluncus curtisii, Fusobacterium spp..

В дополнение к вышеуказанным методам диагностики бактериального вагиноза, образцы отделяемого влагалища всех 146 женщин исследовались методом ПЦР (в научно-исследовательской лаборатории научно-производственной фирмы ООО «Гентех» г. Москвы) и культуральным методом (в лабораторно-диагностическом отделении клиники акушерства и гинекологии им. В.Ф. Снегирева ММА им. И.М. Сеченова) на выявляемость в пробах количества Lactobacillus spp., G. vaginalis, Prevotella bivia, Mobiluncus curtisii, Fusobacterium spp., U. Urealyticum и M. hominis (табл.11,12,13).

ПК1 ПК2 ОК 1 2 3

Gardnerella vaginalis

Lactobacillus spp.
Рис. 1. Электрофореграмма результатов ПЦР некоторых исследованных образцов, полученных на диагностической тест-системе «ЛактАм».

ПК1 - положительный контроль - верхняя полоса соответствует фрагменту Gardnerella vaginalis (размер 820 п.н.) в количестве 106 копий/мл; нижняя – фрагменту Lactobacillus spp. (размер 558 п.н.) в количестве 107 копий/мл.

ПК2- положительный контроль - верхняя полоса соответствует фрагменту Gardnerella vaginalis (размер 820 п.н.) в количестве 107 копий/мл; нижняя – фрагменту Lactobacillus spp. (размер 558 п.н.) в количестве 108 копий/мл. ОК отрицательный контроль; 1-3 – клинические образцы (отделяемое влагалища).

На рисунке 1 представлены электрофореграммы результатов некоторых пациенток, полученные при помощи диагностической тест-системы «ЛактАм». В пробе 1 («контрольная группа») интенсивность свечения фрагмента Lactobacillus spp. несколько больше интенсивности свечения нижней полосы ПК2 (т.е. более 108 копий/мл), а свечение фрагмента Gardnerella vaginalis отсутствует. Это означает, что состояние микрофлоры у данной пациентки находится в пределах нормы. В образцах 2 и 3 (группы «бактериального вагиноза») видна картина выраженного бактериального вагиноза: количество Lactobacillus spp. ниже нормы (интенсивность свечения соответствующего фрагмента меньше, чем у ПК1), а количество Gardnerella vaginalis превышает норму (интенсивность свечения соответствующего фрагмента больше, чем у ПК2).




А

ПК ОК 1 2 3 4 5 6 7 8 9




Prevotella bivia

Mobiluncus curtisii

Fusobacterium spp.




Б

ПК ОК 11 12 13 14 15 16 17 18 19



Prevotella bivia

Mobiluncus curtisii

Fusobacterium spp



Рис.2 (А, Б). Электрофореграммы результатов выявления анаэробных бактерий в некоторых образцах, полученных на диагностической тест-системе «АнаэрАм».
ПК - положительный контроль - верхняя полоса соответствует фрагменту Prevotella bivia (размер 454 п.н.) в количестве 104 копий/мл; средняя соответствует фрагменту Mobiluncus curtisii (размер 323 п.н.) в количестве 104 копий/мл; нижняя – фрагменту Fusobacterium spp. (размер 230 п.н.) в количестве 104 копий/мл.

ОК − отрицательный контроль.

1-9 – клинические образцы «контрольной» группы.

11-19 - клинические образцы групп «бактериальный вагиноз»

На рисунке 2 представлены электрофореграммы результатов выявления из некоторых образцов «контрольной» группы (рис. 2А) и групп «бактериальный вагиноз» (рис.2Б) трех видов анаэробных бактерий при помощи мультиплексной диагностической тест-системы «АнаэрАм» с тремя парами праймеров, специфичных для фрагментов геномов Prevotella bivia (фрагмент размером 454 п.н.), Mobiluncus curtisii (323 п.н.) и Fusobacterium spp. (230 п.н.). Во всех 50 образцах (100%) «контрольной» группы анаэробные бактерии Fusobacterium spp., Mobiluncus curtisii, Prevotella bivia выявлены не были. На рисунке 2А представлены результаты некоторых из исследованных образцов «контрольной» группы. Во всех 96 образцах (100%) групп «бактериальный вагиноз» выявлено от одного до трех видов анаэробных бактерий в количестве более 104 копий/мл, при этом в 45 образцах (46,9%) обнаруживались все три вида бактерий. На рисунке 2Б представлены результаты некоторых из исследованных образцов групп «бактериальный вагиноз».
При культуральном исследовании (таблица 12) в 47 образцах (94,0%) контрольной группы, которые в ПЦР соответствовали показателям нормофлоры, титр Lactobacillus spp. составлял от 109 до 1011 КОЕ/мл, а G.vaginalis или не определялась (в 27 образцах) или ее титр не превышал 106 КОЕ/мл (в 20 образцах). В 3 случаях, соответствовавших в ПЦР норме, Lactobacillus spp. определялись в титре 105-106 КОЕ/мл и G. vaginalis - 104-105 КОЕ/мл. Условно-патогенные микроорганизмы (Staphylococcus spp., Streptococcus spp , E. coli, Enterobacteriaceae) в контрольной группе содержались в низких титрах (менее 10 4 КОЕ/мл). (Таблица 11)

Методом ПЦР в контрольной группе (Таблица 12) во всех 50 образцах (100%) Lactobacillus spp. определялись в количестве более 108 копий/мл, а G. vaginalis – менее 106 копий/мл, что соответствует показателям нормы. Во всех 50 образцах (100%) контрольной группы анаэробные бактерии - Fusobacterium spp., Mobiluncus curtisii, Prevotella bivia выявлены не были. (рис.1, 2А). (Таблица 13).

При культуральном исследовании в I группе (Таблица 11) во влагалищном отделяемом женщин доминировали следующие микроорганизмы: G. vaginalis (100,0%), Bacteroides spp. (20,0%), Mobiluncus spp. (20,0%), Prevotella spp. (13,3%), Peptostreptococcus spp. (13,3%), Fusobacterium spp. (3,3%). Lactobacillus spp. (Таблица 12) не выявлялись в 11 (36,7%) образцах; выявлялись в титре 104-5 КОЕ/мл в 7 (23,3%) образцах и в титре 107-8 КОЕ/мл в 12 (40,0%) образцах. Условно-патогенные микроорганизмы (Staphylococcus spp., Streptococcus spp, E. coli) встречались в низком титре (менее 10 4 КОЕ/мл).



Методом ПЦР во всех 30 (100%) образцах I группы женщин Lactobacillus spp. определялись в количестве менее 108 копий/мл, из них в 11 (36,7%) – не выявлялись; G. vaginalis - в количестве более 107 копий/мл, что полностью соответствует клиническому диагнозу бактериальный вагиноз. (Таблица 12). Выделилось три подгруппы образцов, различающихся количеством Lactobacillus spp. при одинаковом содержании G. vaginalis. Выделение анаэробных бактерий (104 и более копий/мл) методом ПЦР: Prevotella bivia (36,7%), Mobiluncus curtisii (60,0%), Fusobacterium spp. (33,3%) (рис.1,2Б).

При культуральном исследовании влагалищного отделяемого женщин II группы получены следующие результаты. (Таблица 11). Характерно преобладание морфотипов: G. vaginalis (100,0%), Prevotella spp. (25,0%), Bacteroides spp. (41,7%) во влагалищном отделяемом. Lactobacillus spp. (Таблица 12) выявлялись в 4 (33,3%) случаях в титре 104-5 КОЕ/мл, в 5 (41,7%) случаях – не выявлялись, в 3 (25,0%) случаях – в титре 106-7КОЕ/мл. В последних 3 упомянутых образцах выявлено одинаковое количество Lactobacillus spp. и G. vaginalis (106-7КОЕ/мл). Эти образцы по-видимому, можно отнести к “пограничному” состоянию микрофлоры генитального тракта. Наибольший удельный вес (Таблица 11) приходился на сочетание бактериального вагиноза и кандидозного вульвовагинита. Такая микробиологическая картина влагалищного микроценоза выявлена у 9 (75,0%) из 12 женщин II группы. Среди видов дрожжеподобных грибов доминировал вид Candida albicans - 8 (88,9%), в одном случае был выделен вид Candida glabrata- (11,1%). Ассоциация возбудителей бактериального вагиноза с условно-патогенными бактериям (E. coli, Streptococcus spp, Enterobacteriaceae) в высоком титре (более 105 КОЕ/мл) в микробиотопах влагалища имела место у 5 (41,7%) из 12 женщин II группы. Также у двух женщин выявлена U. urealyticum в титре 103.

Методом ПЦР (Таблица 12) в 9 (75,0%) образцах II группы женщин G. vaginalis определялась в количестве более 107 копий/мл, в 3 (25,0%) - в количестве (более 106 менее 107) приблизительно 107 копий/мл. Во всех случаях Lactobacillus spp. определялись методом ПЦР в количестве менее 108 копий/мл, из них в 5 (41,7 %) - не выявлялись. Выделение анаэробных бактерий (104 и более копий/мл) методом ПЦР: Prevotella bivia (66,7%), Mobiluncus curtisii (25,0%), Fusobacterium spp. (33,3%) (рис.1,2Б). (Таблица 13).

Анализируя результаты культурального исследования женщин III группы (Таблица 11), обращает на себя внимание абсолютное доминирование G. vaginalis (100,0 %), Bacteroides spp.(85,2%), Prevotella spp. (27,8%), Mobiluncus spp. (9,3%), Fusobacterium spp. (5,6%). Lactobacillus spp. (Таблица 12) выявлялись в 18 (33,3%) случаях в титре 107-8 КОЕ/мл, в 14 (25,9%) случаях в титре 104-5 КОЕ/мл, в 15 (27,8%) случаях – не выявлялись, в 7 (12,9%) случаях – в титре 106-7КОЕ/мл. Последние 7 упомянутых образцов, в которых выявлено одинаковое количество Lactobacillus spp. и G. vaginalis (106-7КОЕ/мл), отнесены к “пограничному” состоянию микрофлоры генитального тракта. Ассоциация возбудителей бактериального вагиноза с условно-патогенными бактериями (E. coli, Enterobacteriaceae, U. Urealyticum, M. hominis) в высоком титре (более 105 КОЕ/мл) и C. trachomatis в микробиотопах влагалища имела место у большинства женщин III группы. (Таблица 14).




Таблица 11.

Результаты культурального исследования вагинального отделяемого


у обследованных женщин на факультативно-анаэробные бактерии, грибы и лактобациллы.

Микроорганизмы (КОЕ/мл)



I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная группа (n= 50)

Всего


(n= 146)

Микроаэрофильные :

Lactobacillus spp. до 106

Lactobacillus spp. 10 7 и более



G. vaginalis до 106

G. vaginalis 10 7 и более



18 (60,0±7,1%)

12 (40,0±4,0%)

0(1,7±0,1%)

30 (98,3±9,3%)*



9 (75,0±14,9%)*

3 (25,0±8,6%)

0(4,2±0,3%)

12(95,8±15,7%)*



47(87,1±15,3%)*

7 (12,9±2,7%)

0(0,9±0,09%)

54(99,1±15,7%)*



3 (6,0±0,3%)

47 (94,0±8,7%)*

50 (99±8,9%)*

0(1,0±0,2%)



77 (52,7%)

69 (47,3%)

50 (34,2%)

96 (65,8%)



Облигатно-анаэробные грамположительные:

Mobiluncus spp. до 106

Mobiluncus spp. 10 7 и более

Peptostreptococcus spp. до 104

Peptostreptococcus spp. 10 5 и более


0(1,7±0,1%)

5(20,0±2,4%)

0(1,7±0,1%)

4 (13,3±1,6%)



0(4,2±0,3%)

0(4,2±0,3%)

0(4,2±0,3%)

2 (16,7±5,2%)



0(0,9±0,09%)

5(9,3±1,8%)

0(0,9±0,09%)

0(0,9±0,09%)



0(1,0±0,2%)

0(1,0±0,2%)

12 (24,0±4,7%)*

0(1,0±0,2%)



-

11 (7,5%)

12 (8,2%)

6 (4,1%)


Облигатно-анаэробные грамотрицательные:

Prevotella spp. до 104

Prevotella spp. 10 5 и более

Bacteroides spp. до 104

Bacteroides spp. 10 5 и более

Fusobacterium spp. до 103

Fusobacterium spp. 10 4 и более



0(1,7±0,1%)

4 (13,3±1,6%)

0(1,7±0,1%)

6 (20,0±2,4%)

0(1,7±0,1%)

1 (3,3±0,2%)



0(4,2±0,3%)

3 (25,0±8,6%)

0(4,2±0,3%)

5 (41,7±13,9%)

0(4,2±0,3%)

0(4,2±0,3%)




0(0,9±0,09%)

15 (27,8±6,0%)*

0(0,9±0,09%)

46(85,2±15,0%)*

0(0,9±0,09%)

3 (5,6±0,3%)



0(1,0±0,2%)

0(1,0±0,2%)

0(1,0±0,2%)

0(1,0±0,2%)

0(1,0±0,2%)

0(1,0±0,2%)




-

  1. (15,1%)

-

57 (39,0%)

-

4 (2,7%)



* - различия достоверны, р < 0,05


Таблица 11 (продолжение).


Микроорганизмы (КОЕ/мл)

I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная группа (n= 50)

Всего


(n= 146)

Факультативно-анаэробные грамположительные

E.coli до 103

E.coli 10 4 и более

Staphylococcus spp. до 104

Staphylococcus spp. 10 5 и более

Streptococcus spp. до 104

Streptococcus spp. 10 5 и более

Enterobacteriaceae до 104

Enterobacteriaceae 10 5 и более

M. hominis до 103-4

M. hominis 10 4 и более

U. urealyticum до 103-4

U. urealyticum 10 4 и более

Дрожжеподобные грибы рода Candida

10 4 и более



1 (3,3±0,2%)

0(1,7±0,1%)

4 (13,3±1,6%)

0(1,7±0,1%)

1 (3,3±0,2%)

0(1,7±0,1%)

0(1,7±0,1%)

0(1,7±0,1%)

0(1,7±0,1%)

0(1,7±0,1%)

0(1,7±0,1%)

0(1,7±0,1%)


0(1,7±0,1%)



0(4,2±0,3%)

4 (33,3±13,6%)

0(4,2±0,3%)

0(4,2±0,3%)

0(4,2±0,3%)

3 (25,0±8,6%)

0(4,2±0,3%)

4 (33,3±13,6%)

0(4,2±0,3%)

0(4,2±0,3%)

2 (16,7±5,2%)

0(4,2±0,3%)


9(75,0±14,9%)*

0(0,9±0,09%)

7 (12,9±2,7%)*

0(0,9±0,09%)

0(0,9±0,09%)

0(0,9±0,09%)

0(0,9±0,09%)

0(0,9±0,09%)

9 (16,7±3,07%)*

0(0,9±0,09%)

22 (40,7±6,5%)*

0(0,9±0,09%)

31 (57,4±6,7%)*


0(0,9±0,09%)


3 (6,0±0,3%)

0(1,0±0,2%)

11 (22,0±4,3%)*

0(1,0±0,2%)

7 (14,0±1,2%)*

0(1,0±0,2%)

7 (14,0±1,2%)*

0(1,0±0,2%)

0(1,0±0,2%)

0(1,0±0,2%)

0(1,0±0,2%)

0(1,0±0,2%)


0(1,0±0,2%)


4 (2,7%)

11 (7,5%)

15 (10,3%)

-

8 (5,5%)



3 (2,1%)

7 (4,8%)


13 (8,9%)

-

22 (15,1%)



2 (1,4%)

31 (21,2%)


9 (6,2%)

* - различия достоверны, р < 0,05



Таблица 12.

Сравнительный анализ оценки состояния микрофлоры генитального тракта

женщин с помощью ПЦР (набор “ЛактАм”) и культурального метода.




Анализируемые признаки

I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная

Группа (n=50)

Число образцов



12


7

11


4


5


3


18


14


15

7


47


3


ПЦР ,
(копий/мл)


Lactobacillus spp.
G. vaginalis

<108
>107

<108
>107

-

>107



<108
>107

-

>107





<108
107

<108
>107

<108
>107

-

>107




<108
107

>108
<106

>108
<106

Культуральный

Метод,
(КОЕ/мл)




Lactobacillus spp.

G. vaginalis



107-8

>107



104-5

>107



-

>107



104-5

>107



-
>107

106-7

106-7



107-8

>107



104-5

>107



-
>107

106-7

106-7



109-11


<106

105-6

104-5





Таблица 13

Особенности выявления методом ПЦР Fusobacterium spp., Mobiluncus curtisii.


Prevotella bivia, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis (наборы «АнаэрАм», «УреАм», «МикгАм»).


ПЦР, 10 4 и более (копий/мл)


I группа


(n=30)

II группа


(n=12)

III группа


(n=54)

Контрольная группа (n = 50)

Всего


(n=146)

Prevotella bivia


Mobiluncus curtisii
Fusobacterium spp.
Mycoplasma hominis
Ureaplasma urealyticum

11 (36,7 %)


18 (60,0%)
10 (33,3%)
-
-

8 (66,7%)


3 (25,0%)
4 (33,3%)
-
-

22 (40,7%)


24 (44,4%)
19 (35,2%)
26 (48,1%)
39 (72,2%)

-
-
-


-
-

41 (28,1%)


45 (30,8%)
33 (22,6%)
26 (17,8%)
39 (26,7%)

Методом ПЦР (Таблица 12) в 47 (87,1%) образцах III группы женщин G. vaginalis определялась в количестве более 107 копий/мл, в 7 (12,9%) - в количестве (более 106 менее 107) - приблизительно 107 копий/мл. Во всех случаях Lactobacillus spp. определялись методом ПЦР в количестве менее 108 копий/мл, из них в 15 (27,8 %) - не выявлялись. Выделение анаэробных бактерий (104 и более копий/мл) методом ПЦР: Prevotella bivia (40,7%), Mobiluncus curtisii (44,4%), Fusobacterium spp. (35,2%) (рис.1, 2Б). (Таблица 13).

Таким образом, при анализе результатов культурального исследования вагинального отделяемого у обследованных женщин на факультативно-анаэробные бактерии, грибы и лактобациллы были получены следующие достоверно значимые показатели. Lactobacillus spp. (Таблица 11) в титре до 106 КОЕ/мл – наиболее характерны для II и III групп (75,0±14,9% и 87,1±15,3% соответственно) по сравнению с I и контрольной группами (60,0±7,1% и 6,0±0,3%, соответственно), (р < 0,05). В контрольной группе в отличие от всех трех других групп с бактериальным вагинозом Lactobacillus spp. в титре 10 7 и более КОЕ/мл были зарегистрированы в 94,0±8,7%. Противоположная ситуация выявлена при анализе титров G. vaginalis: в титре 10 7 и более КОЕ/мл G. vaginalis чаще выявлялись в трех группах с бактериальным вагинозом (98,3±9,3%, 95,8±15,7%, 99,1±15,7%, соответственно, р < 0,05) по сравнению с контрольной группой (1,0±0,2%). В титре до 106 КОЕ/мл G. vaginalis – чаще выявлялись в контрольной группе (99±8,9%) в отличие от всех трех других групп с бактериальным вагинозом. Также были выявлены достоверно значимые особенности титров Peptostreptococcus spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp. Enterobacteriaceae (до 104 КОЕ/мл) - наиболее характерны для контрольной группы (24,0±4,7%, 22,0±4,3%, 14,0±1,2%, 14,0±1,2%, соответственно, р < 0,05); Prevotella spp., Bacteroides spp., E.coli, Enterobacteriaceae (10 5 и более КОЕ/мл), M. hominis и U. urealyticum (10 4 и более КОЕ/мл) – наиболее характерны для группы бактериального вагиноза в ассоциации с патогенными и/или условно-патогенными возбудителями инфекций урогенитального тракта (27,8±6,0%, 85,2±15,0%, 12,9±2,7%, 16,7±3,07%, 40,7±6,5%, 57,4±6,7%, соответственно, р < 0,05). Дрожжеподобные грибы рода Candida (в титре 104 и более КОЕ/мл) – характерны для группы с бактериального вагиноза в ассоциации с кандидозным вульвовагинитом (75,0±14,9%). (р < 0,05).




ПЦР

Бак. посев
Диаграмма к таблицам 11, 12.

* - различия достоверны, р < 0,05



Диаграмма к таблицам 11,13.

* - различия достоверны, р < 0,05



3.1.4. Ассоциации бактериального вагиноза с патогенными и/или

условно-патогенными возбудителями урогенитальных инфекций.
Таблица 14.

Результаты сочетания бактериального вагиноза с патогенными и/или условно-патогенными микроорганизмами у пациенток III группы.

Инфекционные

Агенты


Количество больных (N=54)

Абс. число

%

Chlamydia trachomatis

32

59,37,1

Ureaplasma urealyticum

39

72,211,4*

Mycoplasma hominis

26

48,16,7

Ассоциация бактериального вагиноза с:

Одним инфекционным

Агентом


21

38,96,3

Двумя инфекционными

Агентами


23

42,66,5

Тремя инфекционными

Агентами


10

18,53,5*

* - различия достоверны, р < 0,05.


Как видно из представленных данных в таблице 14, в III группе женщин методом ПЦР и/или культуральным методом с количественной оценкой обнаружены C. trachomatis у 32 (59,37,1%) пациенток, U. Urealyticum у 39 (72,211,4%) и M. hominis в высоком титре – у 26 (48,16,7%). Выявлено, что чаще бактериальный вагиноз ассоциировался с U. urealyticum по сравнению с M. hominis (р < 0,05).

Только U. Urealyticum в высоком титре обнаружена у 8 (14,8%) женщин, только M. hominis в высоком титре – у 5 (9,3%), только C. trachomatis – у 8 (14,8%).

Таким образом, ассоциация бактериального вагиноза с одним инфекционным агентом в III группе женщин наблюдалась в 21 (38,96,3%) случае. Ассоциация с двумя инфекционными агентами - у 23 (42,66,5%) пациенток, из них у 9 (39,1%) бактериальный вагиноз сочетался с U. Urealyticum и M. hominis в высоком титре, у 12 (52,2%) с C. trachomatis и U. Urealyticum, у 2 (8,7%) C. trachomatis и M. hominis.

У 10 (18,53,5%) пациенток наблюдалась ассоциация бактериального вагиноза с тремя инфекционными агентами: C. trachomatis, U. Urealyticum и M. hominis.

Выявлено, что реже встречались ассоциации бактериального вагиноза с тремя инфекционными агентами по сравнению с одним и двумя (18,53,5%, 38,96,3%, 42,66,5%, соответственно, р < 0,05).

К важным особенностям урогенитального хламидиоза, помимо его малосимптомности и высокой частоты осложнений, относится часто встречающаяся ассоциация с другими возбудителями ИППП, а также многоочаговость с вовлечением в патологический процесс не только мочеполовых органов, но и нередко прямой кишки, глотки, глаз, суставов, сердца, кожи /35,40,51,61/.

Все 32 пациентки с выявленным урогенитальным хламидиозом были обследованы для исключения многоочаговости инфекционного процесса. При этом (таблица 15): методом ПЦР C. trachomatis были обнаружены в ректум – у 15 (46,94,3%), в ротоглотке – у 21 (65,67,5%) женщин.

Таким образом, C. trachomatis чаще выявлялись в урогенитальном очаге (уретра и цервикальный канал) по сравнению с хламидийным поражением ректум и ротоглотки (98,49,3%, 46,94,3%, 65,67,5%, соответственно), (р < 0,05).

C. trachomatis из 2 очагов обнаружены у 18 (56,36,3%) пациенток, из них: у 12 (66,7%) - в урогенитальном очаге и ротоглотке, у 6 (33,3%) в урогенитальном очаге и ректум.

C. trachomatis из 3 очагов обнаружены у 9 (28,13,0%) пациенток – в урогенитальном очаге, ротоглотке и ректум.

Следует отметить, что значительно чаще C. trachomatis выявлялись из двух очагов, чем из трех и одного (56,36,3%, 28,13,0%, 15,61,9%, соответственно), (р < 0,05).

Таким образом, многоочаговость с вовлечением экстрагенитальных очагов хламидийной инфекции наблюдалась в 27 (84,4%) из 32 случаев.


3.1.5. Результаты клинического обследования женщин с учетом многоочаговости хламидийной инфекции.

Таблица 15.

Результаты клинического обследования с учетом многоочаговости хламидийной инфекции у пациенток III группы.

Chlamydia trachomatis



Количество больных (N=32)

Абс. число

%

Урогенитальный очаг (цервикальный канал и уретра)

32



100 (98,49,3)*



Ректум

15

46,94,3

Ротоглотка

21

65,67,5

Выявлено одновременно в :

2 очагах

18

56,36,3*

3 очагах

9

28,13,0

Только УГХ

5

15,61,9

* - различия достоверны, р < 0,05

Среди 21 (65,67,5%) пациентки с наличием C. trachomatis в ротоглотке, 17 (80,9%) страдали хроническим фарингитом и/или хроническим тонзиллитом. При этом все они практиковали орогенитальные контакты.

Среди 15 (46,94,3%) пациенток с наличием C. trachomatis в ректум, 8 (53,3%) женщин практиковали аногенитальные контакты, при этом явления проктита были обнаружены в 4 (26,7%) случаях.

Таким образом, бактериальный вагиноз в настоящее время следует рассматривать не только как частую самостоятельную нозологическую единицу, но и как фон для дополнительного развития ИППП. В этой связи важное значение имеет тщательное лабораторное обследование каждой больной бактериальным вагинозом на ИППП, в том числе проведение скрининга на наличие экстрагенитальных очагов хламидийной инфекции. Обращает на себя внимание, что даже при отсутствии ИППП, у больных бактериальным вагинозом, помимо поражения влагалища, имеют место признаки цервицита и/или уретрита. Это может быть обусловлено реализацией патогенных свойств условно-патогенных микроорганизмов.
3.2. Алгоритм обследования больных бактериальным вагинозом.

скачать файл


<< предыдущая страница   следующая страница >>
Смотрите также:
Аксенова Ольга Александровна современные аспекты клиники, диагностики и лечения бактериального вагиноза у женщин репродуктивного возраста
1798.42kb.
Академия наук республики узбекистан
297.18kb.
Репродуктивное здоровье и гинекология
6445.94kb.
Эфирные масла и фитопрепараты в комплексной терапии бактериального вагиноза
62.64kb.
Врождённые расщелины верхней губы и нёба: современные аспекты хирургического лечения. А. С. Артюшкевич, Д. А. Гричанюк
147.55kb.
Остеопатия – это такие методы диагностики и лечения, в которых инструментом осмотра, диагностики и лечебных манипуляций выступают добрые и чуткие руки вашего врача. Остеопатия
50.13kb.
Сравнение эндоваскулярного и медикаментозного лечения больных с гемодинамически значимым поражением ствола левой коронарной артерии при стабильном течении ибс: данные 3-х летнего наблюдения
583.5kb.
Молостов Валерий Дмитриевич Иглотерапия и мануальная терапия
11664.31kb.
1. Молекулярно-генетические и патобиохимические механизмы развития мультифакториальных заболеваний у человека
32.28kb.
Женская статистика
21.1kb.
Тарасова Ольга Александровна, учитель начальных классов второй квалификационной категории 2013 год Раздел I
296.39kb.
Программа по учебному предмету по. 02. Уп. 02. История изобразительного искусства для учащихся 2 5 классов
1568.12kb.